一、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及方法原理

參考標(biāo)準(zhǔn)GB/T17817-2010《飼料中維生素A的測定高效液相色譜法》、 GB/T 17818-2010 《飼料中維生素D3的測定高效液相色譜法》、GB/T 17812-2008 《飼料中維生素E的測定高效液相色譜法》。

預(yù)混料中的維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）用甲醇溶液提取，試液注入高效液相色譜柱，用紫外檢測器在275 nm處測定，外標(biāo)法計(jì)算維生素A、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）含量。

二、主要儀器設(shè)備

1、上海儀電分析L210高效液相色譜儀，帶紫外檢測器；

2、超聲波水?。?/span>

3、百分之一電子天平；

4、真空抽濾裝置。

三、測定方法

1、混合標(biāo)樣配置

維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)各10.0 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，混勻，4℃下保存。該貯備液濃度為0.1 mg/mL。

維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取各標(biāo)準(zhǔn)貯備液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。

2、試樣溶液的制備

稱取試樣1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中，加入約80 mL甲醇，于 65 ℃超聲波水浴中超聲提取30 min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻后過0.45 μm濾膜過濾。將試樣溶液進(jìn)一步稀釋至合適濃度，用于實(shí)驗(yàn)分析。

3、高效液相色譜儀參考條件

色譜柱：C18 4.6 mm(i.d)×150mm；

流動(dòng)相：95%甲醇

流速：1 mL/min；

柱溫：室溫

波長：275 nm；

測定：取相同體積試樣制備液和標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時(shí)間按定性，外標(biāo)峰面積法定量。

四、測定結(jié)果

1、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

2、工作曲線的繪制

維生素A乙酸酯工作曲線見下圖，線性相關(guān)系數(shù)：0.9998