液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器，具有高分辨率、高靈敏度、速度快、分離效率高、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析、石油化工等各種領(lǐng)域。高效液相色譜進樣前，必須選擇一種合適的溶劑體系，若溶劑選擇不當會使得峰形發(fā)生不同程度的異常，進而影響分析結(jié)果。

上海儀電分析LC220高效液相色譜儀

更多實驗室儀器產(chǎn)品及應用請來電咨詢，電話13513512998

一、溶劑效應的概念

通常情況下我們認為的溶劑效應是樣品溶劑強度大于流動相強度時造成的色譜峰變形的現(xiàn)象。但我們會發(fā)現(xiàn)，有時我們的樣品溶劑的強度并未大于流動相，但由于加入了某些稀釋劑，使得峰形變形情況依舊出現(xiàn)。因此廣義上對溶劑效應的概念應擴展為由于樣品中某些組分在稀釋劑與流動相中的存在狀態(tài)有較大差異，導致色譜行為表現(xiàn)異常的情況。

二、溶劑效應的原因

1、溶劑強度

這是普遍意義上的溶劑效應成因，如當流動相組成為低比例的乙腈水溶液，而樣品溶劑為純乙腈時，會由于溶劑的強度大于流動相而產(chǎn)生峰分叉或峰拖尾。

2、進樣體積

當進樣體積較小時，擴散至流動相中的溶質(zhì)占大多數(shù)，且擴散在很短時間內(nèi)完成，因此峰形與用流動相直接溶解樣品無大差異。隨著進樣的體積增大，留在溶劑本身里的溶質(zhì)的量逐漸增大，當進樣體積增大到一定數(shù)量，留在溶劑里的溶質(zhì)的量變得不可忽略，在色譜圖上就表現(xiàn)為色譜峰的分叉、拖尾等。

3、溶劑兼容性

有時當我們使用流動相或流動相中的有機相無法直接溶解樣品，這時很多人會選擇使用氯仿、甲苯等能溶的溶劑，甚至DMSO溶劑來溶解樣品。這樣進樣的結(jié)果是溶劑與流動相不兼容，溶質(zhì)難以在流動相中擴散。又如在做參比制劑的溶出曲線中，溶媒中經(jīng)常加入表面活性劑。而帶有表面活性劑的溶劑進樣后，由于溶質(zhì)在含有表面活性劑的溶劑中的分配系數(shù)與在流動相中的分配系數(shù)存在較大差異，就會導致峰形的問題，甚至保留時間的漂移。

4、電離狀態(tài)

電離狀態(tài)的差異主要由溶劑和流動相各自的pH差異引起。在反相體系中，目標化合物的存在狀態(tài)不同，保留行為會有明顯的差異，而存在狀態(tài)就取決于目標化合物在不同pH體系內(nèi)的電離狀態(tài)。若樣品在溶劑和流動相中電離狀態(tài)差異較大，樣品溶液在接觸流動相的過程中，來不及緩沖至流動相中的電離狀態(tài)，是個時間如果較長，就容易表現(xiàn)為保留時間發(fā)生錯位或峰形變形。

三、溶劑效應的解決辦法

1、溶劑強度原因解決辦法

即調(diào)整稀釋劑或流動相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動相都是可以的。一般情況下，為避免溶劑強度差異導致的溶劑效應，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑中有機相比例和流動相相當，必要時可略高于流動相，但應當據(jù)其評估其溶劑效應風險。

2、進樣體積原因解決辦法

常規(guī)情況下，為了保證峰形，我們的進樣體積都控制在5-20μL，盡量不要超過25μL。如果不能做到減少至合適的進樣體積，為了得到較好的峰形，應盡量選擇與流動相比例相同或接近的溶劑。

3、溶劑兼容性

使得溶劑與流動相能較好地兼容，目前辦法有兩個：

（1）若流動相或流動相中的有機相無法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲備液，然后用流動相稀釋至所需濃度。

（2）在流動相中加入同樣的助溶劑或表面活性劑，或提高有機相的比例。

4、電離狀態(tài)原因解決辦法

電離狀態(tài)的差異許多情況下會表現(xiàn)為保留時間的漂移或不穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動相一致，或增大流動相的緩沖能力來改善。